石鲽细菌性败血感染症及其病原细菌研究

陈翠珍 房 海 张晓 君 王秀云 巩元芳 葛慕湘

摘要： 2001 — 2002 午，分别对两起养殖的石鲽 (Stone flounder ， Kareius bicoloratus L ． ) 病害进行了检验，均表现为败血症感染特征。经以 20 尾病 ( 死 ) 石鲽 ( 每起病例各 10 尾 ) 做病变组织中细菌检查、细菌分离与鉴定、人 J ：感染试验等的病原学检验，表明两起被检病例均为同种的杀鲑气单胞菌 (Aeromonas salmonicida) 感染；另在其中 1 起病例所检 10尾石鲽的 2 尾中，同时枪出了呈继发感染的不动杆菌 (Acinetobacter) 。通过对所分离后做纯培养的 60 株杀鲑气单胞 菌、 6 株不动杆菌分别进行较系统的表观分类学指征 (Phenotypic information) 及代表菌株 16S rRNA 基因序列测定与系统发行学分析，表明其中的杀鲑气单胞菌为一个新亚种，不动杆菌为琼氏不动杆菌 (Acinetobacter junii) 的一个新形 ? 态型；又择代表菌株送中国典型培养物保藏中心 (CCTCC) 进行了表观性状、 DNA 中 C+Cmol ％的测定等的复核鉴 定，并将其中的杀鲑气单胞菌新亚种定名为杀鲑气单胞菌杀鲽亚种 (Aeromonassalmonicida subsp · flounderacida subsp · nov ． ) 、将其中的琼氏不动杆菌新形态型定名为琼氏不动杆菌形态型 1(Acinetobacter junii morphovar I) 。

关键词：石鲽；细菌性败血症；病原细菌 ? 中图分类号： S941 ． 42

文献标识码： A 文章编号： 1000-3207(2006)-0515-09?

杀鲑气单细胞 [Aeromonas salmonicida(Lehmann and Neumann 1896)GriffinSniezkoand Friddle 1953] 亦 被称为灭鲑气单胞菌，是最早被描述的鱼类病原 菌之一，主要是引起鲑科鱼类的感染发生疖疮病 (Fumnculosis) ，因此在传统上也多认为鲑科鱼类 易感杀鲑气单胞菌。事实上，除了鲑科外的其他 鱼类感染杀鲑气单胞菌，在近些年来已多有记 述，所表现出的病害类型也并非均为疖疮病，且 所造成的危害也是严重的。对于鱼类杀鲑气单胞菌感染症的有效诊断、检疫、预防与治疗及病原学等方面的研究，无论从提高水产养殖生产 经济效益还是就鱼类病原细菌方面来讲，都是具 有较重要意义的。

近些年来，在鱼类细菌性病害的研究中，作者曾 在 2001 — 2002 年分别从野生转为人工养殖的石鲽 Stone flounder ， Kareius bicoloratus L ． Jordan and Sny — der) 呈败血症感染病例的病 ( 死 ) 鱼中有规律地检出 了相应的病原杀鲑气单胞菌，经对分离菌株的鉴定结果表明为杀鲑气单胞菌的新亚种；同时，还在个别病 ( 死 ) 鱼中同时检出了另外一种亦属于具有致病性的细菌，经鉴定表明为不动杆菌属 (Acinetobacter?Brisou and Prevot 1954) 中琼氏不动杆菌 (A ． junii Bou · vet and Grimont 1986) 的一种新形态型。基于这些病 ? 原细菌在石鲽甚至有的在其他鱼类中的感染发病尚 ? 少见报道，加之这些相应病原细菌为新的亚种或形 态型，为便于学术交流，现将所检石鲽病例的发病情 况、相应病原细菌的主要特性等的研究结果作如下报告。

2 ． 1 发病情况与主要病变 2001 年 3 月和 2002 年 3 月，分别对河北某两个海水鱼养殖场所养殖的约 2 — 3 月龄石鲽 ( 均为采白海区野生转为人工养殖的 ) 病例进行了检验，两起病 例 ( 记作：病例 1 、病例 2) 均呈败血症感染，缺乏特征 性的症状与病变。

2 ． 1 ． 1 病例 1 该场所养石鲽共 50000 尾左右，初见有病鱼且陆续死亡，随之死亡增多，病鱼表现摄食减少至废绝、游动缓慢、上浮至水面等，病程约持续 60d 左右，共发病约 45000 尾 ( 占约 90 ％ ) 、死亡约 40000 尾 ( 发病致死率约 88 ． 9 ％ ) 。在发病渐进高峰期时，取 15 尾发病濒死及新鲜死亡石鲽进行病变检验，发现其外观无典型特征病变，剖检病变主要为：肝脏 ( 其中 9 尾有不同程度出血点 ) 、脾脏、肾脏均呈不同程度肿胀及不同程度充血迹象， 肠臌气且肠内几乎无食物、均有不同量的淡黄白色黏液，有 5 尾鱼的肠黏膜存在数量不等及程度不同的出血点，有 6 尾鱼肠内存在黄白酪样、不规则 的小块状物。

2 ． 1 ． 2 病例 2 该场所养石鲽共 5000 尾左右，其发 ? 病症状等与病例 l 的基本一致，病程约 40d 左右，共 发病 5000 尾左右 ( 占 100 ％ ) 、死亡约 4500 尾 ( 发病 致死率约 90 ％ ) 。于发病渐进高峰期时，取 13 尾发 病濒死及新鲜死亡石鲽进行病变检验，其外观无典 ? 型特征病变，仅见有的鳍充血或出血，剖检病变均主 要为：肝、脾、肾不同程度的肿胀和充血，有 4 尾的胆 囊肿大， 3 尾的肾有不同程度出血点， 4 尾的肝有不同程度出血点，肠臌气且肠内几乎无食物、有不同量 的淡黄白色黏液。

2 ． 2 肝组织中的细菌分别取上述两起病例经剖检后的各 10 尾石鲽 ( 各先做 1 — 10 的编号 ) 共 20 尾的病变肝组织，做抹 片后经革兰氏染色镜检，发现均有不同量革兰氏染 色阴性、无芽孢、两端钝圆、散在或有的成双排列、大小多在 0.5 — 1.Oum X 1.0 — 2.2pm 的杆菌。

2.3细菌分离与纯培养情况

2 ． 3 ． 1 细菌分离 分别取 2 ． 2 所述各 10 尾石鲽共 20 尾的肝、脾、肾、肠内容物 ( 黏液及黄白色酪样物 ) 为材料，按 1 ． 2 中所述划线接种于培养基平板及做 细菌培养，结果从每尾被检鱼的各种被检组织中均 分离出了数量不等但均为多量的 ( 肠内容物材料相对其他材料的较少些 ) 呈同种特征的纯一的菌落 ( 记 作： A 菌 ) ；另外，在病例 l 的第 5 号和第 9 号两尾鱼 中还分离出了在数量上与 A 菌差异不明显的另一 ? 种特征一致的菌落 ( 记作： B 菌 ) 。